该项研究应用单克降抗体(McAb)、基因工程技术手等手段,以严重危害世界养禽业的新城疫 (ND)和马立克氏病(MD)为研究对象,通过McAb功能抑制试验和HN、F基因瞬时表达试验,探 讨了NDV和MDV糖蛋白的致病作用及其与发病的关系。
研究发现NDV HN蛋白在病毒与宿主细胞的识别和吸附过程中起重要作用,它通过对NDV蛋白 上受体结合位点的封闭,阻断病毒与宿主细胞的吸附,进而抑制细胞结合,起到中和病毒的 作用。证实HN蛋白上有促进或启动融合的功能区,该区与HA是分开的。F蛋白是介导细胞融 合与引起ND发病呈正相关,抗F蛋白McAb通过抑制细胞融合起到中和作用。抗F蛋白McAb有4 株具有强毒特异性,能区分强弱毒。首次用HN和F两个基因表达载体转染在CEF上,通过瞬时 表达证明ND是由NDV糖蛋白F和HN协同作用引起的,单一F或HN不能致病,并且F蛋白的裂解活 化,是决定NDV病原性的基本条件,强毒较弱毒容易裂解。
用重组gB为免疫抗原,得到两株抗MDV的Gb单抗的杂交瘤细胞株BA4和BD8,在间接荧光抗体 试验和免疫沉淀反应中BA4仅和I型MDV反应,而BD8和所有三型MDV均发生反应。BA4不仅能与 致病性I型反应也能和I型MDV疫苗株反应,是目前国际上唯一真正的I型特异单抗。在细胞上 证明了gB在MDV感染细胞过程中的作用。 首次试验直接观察到MDV糖蛋白gB对易感细胞(外周 血白细胞)表面的识别和粘附作用。利用重组gB免疫SPF鸡,能有效地预防攻毒后的早期急性 死亡,但对MDV引起的肿瘤则无预防作用。
主要技术指标为:(1)确定NDV和MDV的糖蛋白;(2)制备抗NDV、MDV糖蛋白的单克隆抗体;(3 )克隆糖蛋白基因;(4)综合分析各糖蛋白的功能及其在病原致病过程中的作用,阐明它们与 新城疫和马立克氏病发生的关系。